分枝桿菌是包括結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌和麻風分枝桿菌在內的一類特殊病原體，結核病主要是由結核分枝桿菌（Mycobacterium Tuberculosis，MTB）感染后出現(xiàn)的一種慢性感染性疾病，往往會對患者全身多個器官、系統(tǒng)造成危害。有數(shù)據(jù)報道顯示，我國非結核分枝桿菌（NTM）感染的發(fā)病率已經逐漸超過結核病。亞洲人群NTM發(fā)病率已經增長到約39.6例/10萬人年，并且仍以每年增長19例/10萬人的速率快速攀升。NTM是除了結核分枝桿菌和麻風分枝桿菌以外的所有分枝桿菌，種類繁多，現(xiàn)已經發(fā)現(xiàn)的至少50多種，可廣泛感染人體肺部、皮膚、軟組織、淋巴結、血液等部位，臨床癥狀取決于感染部位，肺部感染癥狀與MTB類似，臨床診斷較困難；對大部分抗結核藥物天然耐藥。對于早期不能正確鑒別MTB或者NTM的患者抗結核療效往往較差，而且易導致耐藥菌的產生[1]。
“2035年終結結核病流行”，這是世界衛(wèi)生組織提出的目標，意味著結核病發(fā)病率要降至10/10萬以下。而最新數(shù)據(jù)顯示，全球結核病發(fā)病率在133/10萬，我國發(fā)病率是52/10萬，距離目標均有差距。早期有效的診斷是確保治療效果以及改善預后的重要環(huán)節(jié)，其中顯微鏡檢查是臨床應用較為廣泛的手段，但存在檢出率較低的不足。細菌培養(yǎng)是國內外公認的MTB診斷金標準，但該診斷方式往往需要較長時間，存在時效性欠佳的局限。盡管近年來相關免疫學及分子生物學技術獲得長足發(fā)展，但仍存在檢驗結果尚未規(guī)范或/和適用人群廣泛性較差等問題。由此可見，尋找一種快速、準確，且診斷效能較佳的檢測方法，對改善結核病診斷現(xiàn)狀具有極其重要的意義[2]。
核酸飛行時間質譜（簡稱“核酸質譜”）能夠實現(xiàn)樣品轉化為帶電離子并根據(jù)質荷比實現(xiàn)高度精準分離，最后生成質譜圖，視覺直觀性強，具有PCR技術的高靈敏度、芯片技術的高通量、質譜技術的高精準度以及生物信息的智能分析，重復性高，能夠檢測病原體及其分子分型、藥物代謝基因突變、DNA甲基化分析以及腫瘤突變等顯著優(yōu)勢而逐漸在結核分枝桿菌的鑒定及耐藥檢測中得到廣泛應用[3]。
結核分枝桿菌常用診斷方法的比較
華大吉比愛GBIMToF-1000核酸質譜技術以核酸作為結核分枝桿菌鑒定的生物標志物,通過對多靶點基因片段進行多重PCR特異性擴增，去除脫氧核糖核苷酸后，進行各個位點的單堿基延伸反應，經處理后的延伸反應產物同質譜所需基質混合，放入飛行時間質譜儀中運行，每份樣本會得到獨特的質譜圖，經過判讀后獲得菌種及耐藥信息。
核酸質譜GBIMToF-1000在結核分枝桿菌的鑒定及耐藥檢測流程示意圖
GBIMToF-1000核酸質譜快速鑒定分枝桿菌菌種
GBIMToF-1000核酸質譜鑒定分枝桿菌對常用藥物的耐藥性
Huang Z , Zhang C , Fang X ,et al.Identification of musculoskeletal infection with non-tuberculous mycobacterium using metagenomic sequencing[J]. J Infect, 2019(2).DOI:10.1016/j.jinf.2018.10.002.
張益萌，柏瑩，牟艷玲. 結核分枝桿菌DNA檢測在結核病中的診斷價值[J]. 臨床醫(yī)學研究與實踐,2024,9(21):115-118.DOI:10.19347/j.cnki.2096-1413.202421029.
吳祥兵, 吳聯(lián)朋, 項領, 等. DNA微陣列芯片與質譜技術快速鑒定非結核分枝桿菌的差異性分析［J］. 中華醫(yī)院感染學雜志, 2022, 32(01): 16-20.